你好,
我的客户增加引物的浓度和额外的峰值(下面标有红色广场)在主峰附近。请让我知道可能的原因是什么?请参见下图。谢谢你这么多!
虽然我们确实有一个总体的想法可能导致这些额外的高峰,我们将能够更好地支持你的客户如果你可以发送原始数据文件(.mxp)这些结果…
在看到原始.mxp文件之前,一个评论可以是温度较高离解山峰如看到经常伴随着罕见的拼接的存在…
我非常感谢你的评论和解释,艾伯特!我要求.mxp文件。
虽然我们确实有一个总体的想法可能导致这些额外的高峰,我们将能够更好地支持你的客户如果你可以发送原始数据文件(.mxp)这些结果观察到qpcr@雷竞技raybetagilent.com< mailto:qpcr@雷竞技raybetagilent.com>。
你能转发这个文件吗?
谢谢你！
艾伯特Grafsky
经理,
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在看到原始.mxp文件之前,一个评论可以是温度较高离解山峰如看到经常伴随着罕见的剪接变体的存在目标序列。或者非特异性产物的形成,由于引物组合序列以外的目标,也是导致这样的山峰。因为你指出这个峰值出现在客户增加了引物浓度,看来第二个原因是更有可能。
谢谢你,艾伯特。我现在将发送文件。
嗨qPCR支持团队,
我提交了一份有关社区网站的问题,从Mx3000P额外的高峰。亲爱的艾伯特的建议后,我发送.mxp文件。
额外的峰值出现在文件1月30日晚上,2019年,C1, D1, G1, F1。
客户提供额外的信息。他从当地供应商,使用工具包和qPCR反应设置如下,
1。2实验,1月30日和1月30日晚上,使用qPCR设置相同,区别是在60℃退火和延伸时间。1月30日15秒用于退火/扩展,30多岁,1月30日晚上使用。
2。模板。两个实验(1月30日和1月30日晚上),A1, B1, E1, F1使用未稀释的cDNA、C1, D1, G1, H1 10倍稀释cDNA用作模板。
3所示。引物浓度。A1, B1, C1, D1 1 ul底漆使用,虽然E1, F1, G1, H1 1.25 ul底漆使用。
样品好了
互补脱氧核糖核酸的浓度
引物量
退火/延长时间
结果
A1, B1(1月30)
未搀水的
1 ul
15秒
C1, D1(1月30)
10倍稀释
E1, F1(1月30)
1.25 ul
G1, H1(1月30)
A1, B1(1月30日晚上)
30年代
C1, D1(1月30日晚上)
额外的峰
E1, F1(1月30日晚上)
G1, H1(1月30日晚上)
我同意,非特异性生产形成的可能性增加由于模板稀释,引物增加,退火时间增加。使生产更长的片段也增加了延长时间。正确吗?
最好的问候,
林
亲爱的艾伯特,
完全明白了,非常感谢你的支持。
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