你好,
我的客户增加引物的浓度和额外的峰值(下面标有红色广场)在主峰附近。请让我知道可能的原因是什么?请参见下图。谢谢你这么多!
虽然我们确实有一个总体的想法可能导致这些额外的高峰,我们将能够更好地支持你的客户如果你可以发送原始数据文件(.mxp)这些结果观察到qpcr@雷竞技raybetagilent.com< mailto:qpcr@雷竞技raybetagilent.com>。
你能转发这个文件吗?
谢谢你！
艾伯特Grafsky
经理,
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嗨qPCR支持团队,
我提交了一份有关社区网站的问题,从Mx3000P额外的高峰。亲爱的艾伯特的建议后,我发送.mxp文件。
额外的峰值出现在文件1月30日晚上,2019年,C1, D1, G1, F1。
客户提供额外的信息。他从当地供应商,使用工具包和qPCR反应设置如下,
1。2实验,1月30日和1月30日晚上,使用qPCR设置相同,区别是在60℃退火和延伸时间。1月30日15秒用于退火/扩展,30多岁,1月30日晚上使用。
2。模板。两个实验(1月30日和1月30日晚上),A1, B1, E1, F1使用未稀释的cDNA、C1, D1, G1, H1 10倍稀释cDNA用作模板。
3所示。引物浓度。A1, B1, C1, D1 1 ul底漆使用,虽然E1, F1, G1, H1 1.25 ul底漆使用。
样品好了
互补脱氧核糖核酸的浓度
引物量
退火/延长时间
结果
A1, B1(1月30)
未搀水的
1 ul
15秒
C1, D1(1月30)
10倍稀释
E1, F1(1月30)
1.25 ul
G1, H1(1月30)
A1, B1(1月30日晚上)
30年代
C1, D1(1月30日晚上)
额外的峰
E1, F1(1月30日晚上)
G1, H1(1月30日晚上)
我同意,非特异性生产形成的可能性增加由于模板稀释,引物增加,退火时间增加。使生产更长的片段也增加了延长时间。正确吗?
最好的问候,
林
