如何mitoATP产量计算如果有不同的可氧化的吗基板(用不同的P / O比率)分析媒体?
将ATP-coupled呼吸(OCR)转化为线粒体ATP生产率,化学计量学ATP / ADP磷酸化的氧原子减少在电子传递链的终点必须确定。最大理论P / O值不同燃料和依赖之间的不同化学计量学/燃料氧化的途径,以及效率F1F0 ATP合酶。提供标准XF实验条件下,细胞的混合燃料(主要是葡萄糖、丙酮酸、谷氨酰胺),并且经常内源性燃料存储(糖原、脂肪酸、其他氨基酸)是可用的线粒体氧化。因此,它与几个细胞系进行了测试和验证P / O值为2.75时准确地代表的平均P / O比混合物外源性和内源性可氧化的底物。有关更多信息,请参见白皮书:“量化使用安捷伦海马细胞ATP产量雷竞技raybetXF技术”白皮书量化细胞ATP产量。
当一个诱导XF实时执行ATP率测定,如何诱导率计算和报告吗?
在XF实时ATP诱导试验,诱导率(s)中显示摘要打印输出和测量的平均测定参数的计算表计算的平均利率之间的所有测量严重注入和寡霉素注射。然而,诱导率在每个时间点可以从动力学速率获得数据(衡量表)。
是什么XF ATP率指数定义在实时ATP XF率测定?
XF ATP率指数的比值mitoATP glycoATP产量产量(即mitoATP率/ glycoATP率)。这一比率代表一个定量指标的细胞代谢表型。代谢指标更大比1.0代表细胞代谢大于50%的细胞ATP在哪里通过等/ OXPHOS来自线粒体,而指数小于1显示,超过50%的总ATP是糖酵解途径产生的。自代谢指数ratio-metric测量,它是高度敏感的变化或代谢表型的变化。
为什么XF ATP相同率不同细胞类型的细胞是什么在不同密度板?
细胞的代谢表型会影响细胞的需求ATP。细胞增殖或分化,一般来说,高糖酵解率比细胞汇合的生长缓慢或晚期有区别的。比较之间的实验结果建议保持一致的细胞培养条件和细胞播种密度在整个调查。
为什么必须海马XF DMEM培养基,pH值7.4或海马XF RPMI介质,pH值7.4被用于执行试验?
glycoATP产量的计算需要一个绝对的糖酵解的测量质子射流速度在XF实时ATP率分析。正确计算每,分析媒体必须有一个固定的缓冲能力。低浓度的玫瑰在媒体上提供一致的缓冲区能力值在试验的时间框架。虽然添加消息灵通的缓冲略微降低了ECAR信号,它极大地提高了质量和ECAR数据的一致性,以及每个转换的精度(更多细节见白皮书:提高细胞的量化使用安捷伦海马XF技术糖酵解速率。雷竞技raybet同时,使用XF DMEM或XF RPMI介质pH pre-adjusted 7.4节省时间试验准备,确保一致的分析媒体在XF pH值实验。
我可以用其他海马XF分析媒体运行XF实时ATP率化验吗?
计算准确的glycoATP生产速度要求使用一个试验中无酚红或碳酸氢盐和玫瑰的低浓度缓冲区。因此,使用安捷伦海马XF DMEM雷竞技raybet(或RPMI),建议pH值7.4。任何偏离推荐的媒介和补品(葡萄糖、丙酮酸、谷氨酰胺)将应要求缓冲因素根据经验(使用XF分析仪)为每个试验(见海马XF缓冲因子协议进一步的信息)。任何含有酚红试验介质不能用于XF实时ATP率测定。
当运行一个诱导XF实时ATP率测定,OCR之后寡霉素注射高于基底OCR,发生了什么事?
从氧化增加化合物分开电子传递磷酸化(如FCCP、DNP等)寡霉素注射前通常会导致OCR的增加。然而,这种呼吸不耦合的ATP生产以来,线粒体膜电位下降或没有ATP合酶参与的消散,所以在这些情况下没有ATP生成。在这些情况下,基底mitoATP产量不能计算准确。如果一个解偶联剂化合物怀疑,那么建议包括注射的对照组试验介质+车辆计算基底mitoATP生产速度。
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