考特尼瓦
kristen.sensabaugh如果所有三个抑制剂只造成一个小的减少总OCR ?
过程除了这三种燃料的氧化可能导致基线OCR。这些过程可能进一步被分解成线粒体和nonmitochondrial氧气消耗过程:其他线粒体呼吸:呼吸依赖另一个衬底(s)支持线粒体氧化呼吸。这可能包括(但不限于)短期和中链脂肪酸和氨基酸谷氨酰胺。Nonmitochondrial耗氧量:消耗的氧气被其他细胞的生化过程。这包括(但不限于)非常长链脂肪酸部分氧化的过氧化物酶体和其他细胞酶过程消耗氧气。总耗氧量的nonmitochondrial分数可以测量使用海马XF细胞水压力测试。
为什么依赖报告为零?
如果依赖性不明显高于零或负由于好变化,没有依赖特定的底物。如果细胞不依赖于目标燃料通道,注入抑制剂后OCR可能略有增加。当这种情况发生时,依赖自动设置为0(没有依赖),和灵活性将等于能力。
如果我有消极的灵活性价值,这意味着什么呢?
当OCR的变化很小,变化可能导致消极的灵活性价值。消极的灵活性的价值低于5%通常归因于噪音试验。如果你发现重大的负面的灵活性,联系技术支持。
我怎么能进一步诊断或排除水燃料Flex测试结果?
前面的潜在问题描述(明显的低反应抑制剂,0%依赖,或消极的弹性值)可能进一步诊断通过执行(作为一个单独的测试或添加组)水燃料Flex测试只有媒体注射(没有抑制剂)建立基线呼吸变化是否显著的测定。如果绝对呼吸率(OCR)在缺乏整个化验抑制剂显著向上或向下的趋势,那么这个测试的参数(相对%依赖性,能力和灵活性)将低估或夸张,分别。这取决于大小和方向的基本趋势和变化的大小由于添加抑制剂。限制任何基线向上/向下趋势OCR,确保细胞培养和技术参数的测定已经彻底优化。
将这些抑制剂浓度与细胞吗?
是的,测试使用所有三个化合物浓度远高于他们的EC50值抑制哺乳动物细胞。这些值已经被验证在许多细胞系和初级分离。虽然大多数类型的细胞或细胞系有明显的响应至少一个抑制剂,并不是所有的细胞会回应所有抑制剂。如果不适应一个特定的细胞抑制剂,他们可能不依赖于特定的燃料通道(也就是说,他们关于燃料用于氧化磷酸化)是灵活的。
我怎么解释ECAR和糖酵解在这个试验?
使用的组合抑制剂可以混淆的解释ECAR数据与这个测试由于细胞ATP生产和需求的变化。直接测量糖分解的功能,我们建议使用海马XF糖酵解压力测试。
推荐的试验中不包括脂肪酸,可以添加吗?
虽然不是必需的,但是长链脂肪酸可能会添加到培养基中。我们建议使用单一种类的长链脂肪酸,如海马XF palmitate-BSA粮农组织基质,当测试外源性脂肪酸氧化。注意:只有氧化的长链脂肪酸,如棕榈酸酯,由etomoxir敏感抑制。
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