医生知道格温布恩,Norbert路透社全球技术支持CSD,船帆,荷兰
固相萃取(SPE)是一个相对简单的过程,但它需要一些思考以达到良好的复苏和接受之前清洁你的分析物的分析。如果你的方法优化有条不紊地循序渐进的方式,你将能够轻松提高你的复苏和清洁。
通过将你的方法分解成各自的步骤而不是解决将大大简化问题。
- 吸附剂的选择
- 样品预处理
- 调节
- 示例加载
- 冲洗
- 洗脱
而故障诊断新方法,建议在样本收集洗脱液生成的加法和清洗步骤,除了洗脱步骤。通过分析这些洗脱液,你可以决定,你可能失去分析物。这将为你提供更多的信息关于哪些步骤需要优化为了增加经济复苏。
吸附剂的选择
第一次了解分析物你正试图提取与污染物/干扰在你的样品。寻找化学官能团分析物相对于干扰是独一无二的。然后,选择一个吸附剂可以区分你的分析物和干扰通过这些独特的根。例如,如果您的分析物包含一个芳香苯组,而干扰不,那么可能选择一个(例如债券Elut苯基)苯基阶段。
也考虑了样本矩阵。如果你的分析物有一个带正电的一半,但存在于盐溶液,它不会有效使用阳离子交换剂吸着剂之间会有竞争的分析物,另一个带正电的干扰离子交换网站。
所有这些组件之间存在着一种相互关系。
样品预处理
…是很重要的。如果您将使用非极性吸附剂,如债券Elut C18,和你的分析物控组,预处理样品通过提高或降低pH值为了抵消这个费用。通过中和电荷,这将增加分析物的非极性保留效果。
同样,如果您正在使用一个离子交换吸着剂,调整样本的pH值,以确保大多数分析物会有适当的保留收费。
调节
调节SPE盒准备吸附剂阶段接受你的样品进行预处理。你条件墨盒后最初的有机溶剂(通常是甲醇或乙腈),接着,水或缓冲溶液的pH值与你的样品相似。这将确保分析物遇到相同的环境pH值在应用程序筒和最大化保留在吸附剂上。
一定要避免干燥筒调节或你将会显著降低后复苏。你可以重复调节过程如果你不确定是否墨盒已干涸。
示例应用程序/加载
使用慢流量负载样本。如果流速太快,力从真空或积极的压力源可能大于保留效应产生的吸着剂(离子交换吸着剂尤其如此)。相反,负载样本第一次没有压力,从而使样本最初渗透到吸附剂。然后,慢慢打开真空或正压达到适当的流量。
冲洗
冲洗(又名洗)一个墨盒是清洁和恢复之间的权衡。如果清洁是最重要的,那么一些分析物通常会丢失当墨盒与更强的清洗溶剂冲洗。如果需要恢复,那么最后的样本可能包含一些干扰。每个方法应该考虑哪个更重要,和应该达到一个平衡。
当你冲洗你的墨盒,试一试你的分析物不是高度溶于溶剂,但是,这将消除干扰。使用相同的pH值条件时你的墨盒,从而保持你的分析物和吸附剂之间的保留效果。
如果你处理血清或血浆样品,试着10%的乙腈冲洗为了沉淀蛋白。否则,当你最终提取筒高有机浓度洗脱溶剂,您可能会注意到,洗脱液可能与沉淀的蛋白质。使用这种低浓度有机清洗去除这些蛋白质,导致清洁提取。
在这个阶段一定要完全干燥筒。这将确保完全消除任何多余的清洗溶剂,它可能仍然包含干扰。还记得擦你的任何残余清洗溶剂萃取器。
洗脱
当你洗提分析物筒,有几个步骤可以确保更好的复苏。如果你知道你的一般机制分析物被聘请的吸着剂,选择溶剂或溶剂的组合,这将有效地破坏这些保留机制。
对于非极性的抽取:
- 调整你的pH值洗脱溶剂电离的化合物,从而减少保留效果。
- 包括有机改性剂,如甲醇或乙腈,扰乱任何弱极性交互仍然存在。
如果您使用的是离子交换剂有更多的选择要考虑:
- 洗脱溶剂的pH值可以调整中和电荷对分析物或离子交换网站(不小心超过pH值约束的吸着剂)。
- 更有选择性的抗衡离子也可以引入取代离子交换剂的分析物的网站。
添加洗脱溶剂在几个整除。第一个整除将扰乱滞留效应,而后来整除将迫使溶剂通过墨盒(分析物)。让最初的整除坐在墨盒有点申请前真空。这将允许扰乱保留时间。使用慢流量允许更大的墨盒的停留时间。