在反相高效液相色谱法发生了什么?

哪些参数影响高效液相色谱分离?

诺伯特•路透社、技术经理、全球技术支持CSD经理,船帆,荷兰

介绍

在液相色谱、反相(RP)模式无处不在。即使越来越多的亲水相互作用色谱法(HILIC)应用程序中,RP高效液相色谱法是最常见的技术。这是一个总结当列参数改变。

链长增加

RP阶段进行不同的有机配体,从C1, C2, C3, C4, C6和C8,使用C18甚至更长。烷基链越长,越强的无极的相互作用(主要是伦敦力);增加疏水性和亲水性下降。强相互作用导致更强的保留,即更大的保留因子,k,这也意味着更长的运行时间。早期洗脱峰的分离是强烈影响(k < 5)和很少的洗脱峰,因为洗脱峰,k / (k + 1)项的解析方程几乎没有改变。

方程1:解析方程

表1:影响总结链长度的增加

分析时间	早期洗脱峰的分离	迟洗脱峰的分离	载荷能力	溶剂使用	反压力
增加	有所改善,但 选择性的改变	没有变化	没有变化	增加,由于增加运行时	无显著变化

提高配体密度

上述配体密度强烈相关链长度的变化。我们需要考虑碳负载(阶段中总有机碳百分比)和配体密度(每平方米的配体基材)。他们不能被认为是独立于彼此。经验法则说,低配体密度总是给更多极性相互作用和疏水的,由于硅醇增加互动。

配体密度可以很容易地计算出参数的阶段,如碳含量、表面积和分子量的试剂使用[1、2]:

α1 配体密度(µmol / m2] p1 碳含量(%) 年代0 在[m打赌表面积2/ g) C 一个碳原子的质量(12.01115克/摩尔) n1 固定的碳原子数量 米1 分子的重量(克/摩尔)固定组(M为单功能的阶段1= 58 +兆瓦集团) 例子单功能的C18 (si (CH3)2C18H37): 米1= 58 + 18 * 12 + 37 = 311克/摩尔, n1= 18 + 2 = 20

方程2:Berendsen-de•方程(3、4)

表2:总结影响配体密度的增加

分析时间	早期洗脱峰的分离	迟洗脱峰的分离	载荷能力	溶剂使用	反压力
增加	增加,但 选择性的改变	选择性的改变	增加	增加,由于增加运行时	无显著变化

增加有机修饰符内容

的典型经验法则的关系有机修饰符和保留内容,增加了10 - 15%的有机改性剂会导致减少净保留50%,反之亦然。

高效液相色谱柱的反压力取决于,在其他参数,粘度,η,洗脱液:

ΔP∝η

溶剂混合物的粘度变化的水/乙醇、水/甲醇和水/乙腈是如图1所示。

图1:洗脱液混合物的粘度变化和相应的压降

表3:影响总结有机改性剂含量的增加

分析时间	早期洗脱峰的分离	迟洗脱峰的分离	载荷能力	溶剂使用	反压力
更短的	减少(小k)	小的减少	没有变化	减少,由于减少运行时	改变 (见图1)

改变列的长度

列的长度直接影响的阶段,许多盘子,运行时,反压力和解决通过盘子的数量(见方程(1)。列长度加倍后,√2分辨率增加的因素。

表4:效果翻倍柱长度

分析时间	早期的分离 洗脱峰	分离的 洗脱峰	载荷能力	溶剂使用	反压力
双	积极的效果	积极的效果	双	双	双

改变内部直径

改变列的内部直径影响的阶段,直接内部体积。因为体积的内部直径的平方计算的影响也是平方。

表5:结果翻番的内部高效液相色谱柱的直径

分析时间	早期的分离 洗脱峰	分离的 洗脱峰	载荷能力	溶剂使用	反压力
没有变化 (在最优流)	没有变化	没有变化	四	四	没有变化

改变粒子大小

改变包装材料的颗粒大小,当较小的粒子,导致更高的流量限制和更有效的分离。小颗粒的反压力增加:

ΔP∝1 / dp²

表6:减少颗粒大小的结果

分析时间	早期的分离 洗脱峰	分离的 洗脱峰	载荷能力	溶剂使用	反压力
没有变化	积极的效果	积极的效果	没有变化	没有变化	(强)增加

结论

考虑到上述所有,很容易改变操作条件以提高性能的分析。然而,一次只改变一个参数看每个变化的影响。

引用

1. g . e . Berendsen l .德罗•;“化学结合的链长度的作用阶段和反相液相色谱中的保留机制”;j . Chromatogr。一个196 (1980)21-37。
2. k·d·Lork k·k·昂格尔;“溶质保留在反相色谱固定相的函数性质:n-alkyl链长度和配体密度的影响”;色层法26 (1988)115 - 119。
3. g . e . Berendsen l .德罗•;“准备和色谱性能的一些化学结合阶段反相液相色谱法”;j . Chromatogr液体。1 (1978)561。
4. j·e·桑多瓦尔市;“方程计算表面覆盖的封端色谱键合阶段”;j . Chromatogr。一个852 (1999)375。