哪些参数影响高效液相色谱分离?
诺伯特•路透社、技术经理、全球技术支持CSD经理,船帆,荷兰
介绍
在液相色谱、反相(RP)模式无处不在。即使越来越多的亲水相互作用色谱法(HILIC)应用程序中,RP高效液相色谱法是最常见的技术。这是一个总结当列参数改变。
链长增加
RP阶段进行不同的有机配体,从C1, C2, C3, C4, C6和C8,使用C18甚至更长。烷基链越长,越强的无极的相互作用(主要是伦敦力);增加疏水性和亲水性下降。强相互作用导致更强的保留,即更大的保留因子,k,这也意味着更长的运行时间。早期洗脱峰的分离是强烈影响(k < 5)和很少的洗脱峰,因为洗脱峰,k / (k + 1)项的解析方程几乎没有改变。
方程1:解析方程
表1:影响总结链长度的增加
| 分析时间 | 早期洗脱峰的分离 |
迟洗脱峰的分离 |
载荷能力 |
溶剂使用 |
反压力 |
|---|---|---|---|---|---|
增加 |
有所改善,但 |
没有变化 |
没有变化 |
增加,由于增加运行时 |
无显著变化 |
提高配体密度
上述配体密度强烈相关链长度的变化。我们需要考虑碳负载(阶段中总有机碳百分比)和配体密度(每平方米的配体基材)。他们不能被认为是独立于彼此。经验法则说,低配体密度总是给更多极性相互作用和疏水的,由于硅醇增加互动。
配体密度可以很容易地计算出参数的阶段,如碳含量、表面积和分子量的试剂使用[1、2]:
 |
||||||||||||||
|
方程2:Berendsen-de•方程(3、4)
表2:总结影响配体密度的增加
| 分析时间 | 早期洗脱峰的分离 |
迟洗脱峰的分离 |
载荷能力 |
溶剂使用 |
反压力 |
|---|---|---|---|---|---|
增加 |
增加,但 |
选择性的改变 |
增加 |
增加,由于增加运行时 |
无显著变化 |
增加有机修饰符内容
的典型经验法则的关系有机修饰符和保留内容,增加了10 - 15%的有机改性剂会导致减少净保留50%,反之亦然。
高效液相色谱柱的反压力取决于,在其他参数,粘度,η,洗脱液:
ΔP∝η
溶剂混合物的粘度变化的水/乙醇、水/甲醇和水/乙腈是如图1所示。
图1:洗脱液混合物的粘度变化和相应的压降
表3:影响总结有机改性剂含量的增加
| 分析时间 | 早期洗脱峰的分离 |
迟洗脱峰的分离 |
载荷能力 |
溶剂使用 |
反压力 |
|---|---|---|---|---|---|
更短的 |
减少(小k) |
小的减少 |
没有变化 |
减少,由于减少运行时 |
改变 |
改变列的长度
列的长度直接影响的阶段,许多盘子,运行时,反压力和解决通过盘子的数量(见方程(1)。列长度加倍后,√2分辨率增加的因素。
表4:效果翻倍柱长度
| 分析时间 | 早期的分离 |
分离的 |
载荷能力 |
溶剂使用 |
反压力 |
|---|---|---|---|---|---|
双 |
积极的效果 |
积极的效果 |
双 |
双 |
双 |
改变内部直径
改变列的内部直径影响的阶段,直接内部体积。因为体积的内部直径的平方计算的影响也是平方。
表5:结果翻番的内部高效液相色谱柱的直径
| 分析时间 | 早期的分离 |
分离的 |
载荷能力 |
溶剂使用 |
反压力 |
|---|---|---|---|---|---|
没有变化 |
没有变化 |
没有变化 |
四 |
四 |
没有变化 |
改变粒子大小
改变包装材料的颗粒大小,当较小的粒子,导致更高的流量限制和更有效的分离。小颗粒的反压力增加:
ΔP∝1 / dp2
表6:减少颗粒大小的结果
| 分析时间 | 早期的分离 |
分离的 |
载荷能力 |
溶剂使用 |
反压力 |
|---|---|---|---|---|---|
没有变化 |
积极的效果 |
积极的效果 |
没有变化 |
没有变化 |
(强)增加 |
结论
考虑到上述所有,很容易改变操作条件以提高性能的分析。然而,一次只改变一个参数看每个变化的影响。
引用
- g . e . Berendsen l .德罗•;“化学结合的链长度的作用阶段和反相液相色谱中的保留机制”;j . Chromatogr。一个196 (1980)21-37。
- k·d·Lork k·k·昂格尔;“溶质保留在反相色谱固定相的函数性质:n-alkyl链长度和配体密度的影响”;色层法26 (1988)115 - 119。
- g . e . Berendsen l .德罗•;“准备和色谱性能的一些化学结合阶段反相液相色谱法”;j . Chromatogr液体。1 (1978)561。
- j·e·桑多瓦尔市;“方程计算表面覆盖的封端色谱键合阶段”;j . Chromatogr。一个852 (1999)375。