医生知道埃里克•德威特Norbert路透社*,全球技术支持CSD,船帆,荷兰
高效液相色谱柱的寿命是由多种因素决定的。注入脏或受污染的样品往往导致高效液相色谱柱的寿命减少。本文给出了一些指导如何保护你的高效液相色谱柱,以防污染如何再生你的反相高效液相色谱法列。
最污染的高效液相色谱法列注射造成的脏样品在高效液相色谱柱。例如,石油等非常疏水的样本矩阵,高度芳香材料和蜡能够坚持反相包装材料和改变他们的特征。生物液体如血清或血浆中含有蛋白质的包装材料可以吸附到表面。
一列污染后,其色谱性能可以不同于一个未被污染的列,这会导致保留时间和选择性变化的转变。通常也被污染的列是反压力的问题。
高效液相色谱柱的最佳方式避免污染限制矩阵的引入组件到列。所以,这就需要足够的样品制备注射前的样品到列。
- 通过使用注射器过滤器或过滤的样本科帕奇过滤产品有可能避免小颗粒的引入到列
- 固相萃取,液/液萃取固体支持液体/液体提取非常有效的技术来摆脱一个广泛的矩阵组件,否则会污染你的高效液相色谱柱
- 的使用警卫队列总是建议保护分析柱和增加一生你的高效液相色谱柱
照顾好的样本清理后,它仍然是有可能的,介绍了污染物在高效液相色谱柱。我们将讨论一些实际可行的方法来试图返回键合硅基列或接近到原来的状态。
不同类型的矩阵组件:
矩阵组件是不感兴趣的分析师。约矩阵组件可以分为三组。
- 非常极组件(如盐),洗提从反相柱没有或很少保留。这些组件通常不会引起太大的问题
- 矩阵组成,中间保留。这些组件慢慢洗提列和表现为宽峰(有时在下一次运行),基线干扰或基线漂移。
- 矩阵组件,强烈吸附或吸收的列,像脂肪成分、脂质或疏水蛋白质。流动相组成没有变得强大到足以洗提这些组件。这些矩阵组件将会导致问题。他们通常积累顶部的列。他们可以作为一个新的固定相,导致选择性和将保留时间的变化感兴趣的组件。
如果发生足够的污染情况,反压力问题或完全堵塞的列可以结果。
清洗和再生的保税硅列:
有必要了解污染物的性质和找到合适的溶剂,将删除它们。
当污染强保留物质的结果重复注射,一个简单的清洗工序除去这些组件通常可以恢复列的性能。有时候权力平等主义的手术后,冲洗一列约20列册的有机溶剂(溶剂B在二进制反相系统)就足以消除污染物。
有时,强烈的流动相的溶剂组成部分列不足以去除污染物。在这种情况下一系列的强溶剂将需要清洁的列。如果非生物污染物,然后用户可以通过一个或多个额外的有机溶剂通过列。
清洗溶剂,使用,增加他们的溶剂强度通常结束的溶剂可能非常无极的(如己烷),这有助于溶解非极性油和脂类等物质。的雷竞技raybet安捷伦用户手册正常阶段,反相和极性溶剂的保税列给出了一个可能的组合,从甲醇、异丙醇、二氯甲烷、己烷异丙醇,甲醇。
重要的是要确保每个溶剂的系列混相溶剂。异丙醇通常是作为一个中间溶剂,因为它是可溶于有机溶剂如己烷溶液处理的解决方案。
使用移动与缓冲阶段解决方案时,重要的是不要增加有机溶剂含量太快,为了避免缓冲盐的沉淀,这会导致问题,如插入列熔化,而且插油管或泵密封失败,重要的是先删除缓冲区的一部分流动相通过替换缓冲区和水。
因为污染物通常的列,建议改变列的列在洗。
在血浆和血清等生物材料的列上建立色析法必须使用不同的清洗过程。在大多数情况下100%有机溶剂乙腈和甲醇不溶多肽和蛋白质,因此是无效的清洗反相列。在这种情况下,有机溶剂的混合物与缓冲区,酸,有时可以更有效的离子对试剂。最初,与流动相冲洗一列,有一个有点更高比例的更强溶剂应该尝试。在文献中你也找到更奇异的清洁程序的描述这种类型的污染,这超出了本文的范围。
通常用户倾向于等待与列的洗涤,直到他们看到不寻常的行为。然而,增加污染物的积累将使它更加难以清洁的列。出于这个原因,如果你知道你是对你的反相柱脏样品,建议定期清理你的列基地,增加列的生命周期。