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亲水相互作用液相色谱(HILIC)虽然不是一种新技术，但对许多色谱工作者来说并不熟悉。HILIC使用与更常见的反相液相色谱(RPLC)相同的流动相和系统。然而，它采用极性固定相分离潜在的问题极性分析物和保留带电化合物，包括无机盐。随着极性分析物成为环境监测和生物制药发展的重点，该技术越来越受欢迎。它通常用于反相模式显示分离功率不足时。HILIC与质谱(MS)高度兼容，在使用电喷雾电离(ESI)-MS时非常有用。
HILIC列是如何工作的?
化学家有各种各样的反相色谱柱和化学物质可供选择。然而，如果处理的化合物不能很好地保留在RPLC色谱柱上，HILIC是一个有用的选择，只需对系统或溶剂进行最小的修改。
HILIC机制是由覆盖在固定相颗粒表面的一层薄薄的水驱动的，与高度有机的流动相形成一个分区。极性化合物通过氢键和静电相互作用被水层以及固定相保留。
在实际应用中，HILIC色谱柱能够保留中等至高度极性的分析物。洗脱发生从最低极性到最高极性(与RPLC相反)，梯度从高有机到水。水是HILIC中最强的溶剂，较高的缓冲浓度(通常是甲酸铵或乙酸铵)可以提高溶剂强度，改善峰形状，并可以适度改变选择性。
离子交换通常是HILIC柱上的次要相互作用机制，因为许多极性固定相，包括裸二氧化硅，都是弱酸性或碱性的。它可以导致尾矿和强保留的阳离子或阴离子化合物。电荷中性键合相在分析含有阳离子、阴离子和中性化合物的混合物时很重要。列选择在方法开发过程中非常关键。
(1)极性分析物可以在水层内和水层外分离，极性分析物越多，相互作用越强。
(2)带电的极性分析物也可与二氧化硅表面发生离子交换。
HILIC的优势
除了在一次运行中保留阳离子、阴离子和极性中性的能力外，HILIC技术还提供了RPLC的替代选择性。高度有机的流动相提供了增强的灵敏度与ms兼容的方法在正负模式。
HILIC色谱柱具有新颖的两性离子固定相，它提供了优越的保留和分离，而没有在旧固定相上发现的二次离子交换。多羟基果聚糖(OH5)固定相为极性化合物提供了两性离子相的选择性。
下图显示了Agilent InfinityLab Po雷竞技raybetroshell 120 HILIC(裸二氧化硅)，Agilent InfinityLab Poroshell 120 HILIC- z(两性离子)和Agilent InfinityLab Poroshell 120 HILIC- oh5(多羟基果聚糖)柱显示极性分析物分离的正交选择性。在相同的方法条件下，水溶性维生素的分离显示出HILIC相之间的选择性差异。通过改变方法条件，可以优化每个色谱柱的分离。
洗脱顺序的变化突出了三种色谱柱之间的选择性差异，并表现出互补选择性。
HILIC方法开发
在方法开发过程中，应逐一调整参数，以确定所需的分离需要哪些因素。需要考虑的参数包括:
•缓冲液浓度-高缓冲液浓度增加溶剂强度，可以改善峰形状和轻微改变选择性。在LC/MS中，较高的缓冲液浓度会引起离子抑制。
•流动相pH值-这改变了化合物的电荷状态及其极性。它可以决定离子交换保留机制是否可以发生，以及发生到什么程度。
•色谱柱温度-较高的温度可以提供更好的峰形状，而降低温度可以使分析物保持更长时间，提高选择性。
InfinityLab解决方案
为了提高色谱分离的效率和重现性，InfinityLab Poroshell 120列利用表面多孔颗粒进行高分辨率分离。与传统的全多孔颗粒相比，InfinityLab pororshell 120柱可确保更小的颗粒尺寸分布。这使得更均匀的填充柱颗粒，和短的分析物扩散路径进出多孔层。其中三种色谱柱是为HILIC分离而完美设计的:InfinityLab Poroshell 120 HILIC、InfinityLab Poroshell 120 HILIC-Z和InfinityLab Poroshell 120 HILIC-OH5。
新的安捷伦Inf雷竞技raybetinityLab灭活剂添加剂现在能够使用户减少敏感分析物与仪器中金属之间的相互作用，消除代谢组学和极性农药分析的主要障碍。它是一种独特的流动相添加剂，通过减少HPLC, UHPLC或LC/MS系统中分析物与金属相互作用的量来增加仪器的整体灵敏度。
持续的创新
在InfinityLab工具箱中添加失活剂添加剂是HILIC色谱柱优化极性分析物分离的又一步。用于HILIC色谱柱的表面多孔颗粒的创建使用户能够使用HILIC- z固定相保留高电荷化合物(包括无机盐)。具有交替选择性的极性化合物可以用HILIC-OH5相分离。
与其他色谱柱相比，HILIC可以与C18色谱柱一起使用(极性分析物通常分离不好)，以获得互补选择性。HILIC可以在不进行离子配对或衍生化的情况下分离这些极性化合物，从而降低了实验室成本，提高了通量。
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仅供研究使用。不用于诊断程序。
关键字;HILIC, InfinityLab，色谱，HPLC，极性分析
