Anne_blackwell
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对于年龄的逆相分离，包括肽映射，已经使用基于二氧化硅的C18列和添加到移动阶段的TFA完成。但是，随着更多的实验室使用MS检测进行肽映射，用甲酸而不是TFA表现良好的列正在越来越受欢迎。您是否曾经停止考虑分离中的TFA或甲酸正在做什么？我承认是一名质谱师，我知道我想避免使用TFA，因为这会导致离子抑制和伤害敏感性，但是我从未真正考虑过它在LC分离中所扮演的角色。
为了了解这些酸性离子配对剂的情况，我们需要查看硅烷酚相对于这些酸的解离常数。PK一个残留的硅醇与PK非常相似一个甲酸的含量，因此，当使用甲酸移动相时，这两个物种都会在两个物种上混合质子酸和无原位的位点。TFA是一种较强的酸，因此主导，放弃其质子并完全质子化和中和硅烷醇。
柱制造商竭尽全力阻止这些残留的硅烷醇（这就是您看到列描述为“端盖”的情况），但现实是，完全难以完全做。在甲酸移动相的中度酸度（pH〜4）下，这些带负电荷的硅烷酚与带正电的蛋白质和肽的离子相互作用可能存在不良的离子相互作用，从而导致尾部和峰值形状差。
TFA是一种足够强的酸，这些硅烷醇被中和，TFA阴离子形成离子对，在肽上具有正电荷。离子相互作用被阻塞，并且您的分离纯粹基于反相相互作用。甲酸部分阻断了这些相互作用，但不如较强的酸有效。
现在，我们真的宁愿使用甲酸进行质量检测，因为TFA会导致离子抑制，因此降低了敏感性。理想情况下，我们想在不牺牲峰形状的情况下做到这一点，因此我们需要使用甲酸移动相的峰形状解决方案。在我们的AdvanceBio肽加柱中采用的方法是化学修饰二氧化硅表面以阻断残留的硅烷醇并排除带正电荷的样品。这使我们能够获得良好的尖峰和良好的峰值能力，用于使用甲酸移动相位的肽映射进行MS检测。
我想结束一些免责声明。我不想传达您不能使用基于“常规”二氧化硅的列的甲酸，也不能使用质量规格的TFA。有时情况可能需要这些不理想的组合。也许您有很多样品，可以通过一些离子抑制作用，或者您的肽图并不复杂，因此您的峰形状不足。在这里，了解分离中发生的事情使您可以根据自己的优先事项做出明智的决定。正如一个诚然宁愿忘记一位特定教授分配给一年级学生的无尽解离曲线问题的人，回到这些基础知识仍然有所帮助。
以后再聊！
安妮
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