翻转氨基酸分析

还记得小时候有“相反日”吗?HILIC有点像反相色谱法。

之前我们介绍一堆漂亮的标准方法——样品衍生化氨基酸分析,反相分离,紫外检测。几周前,我提到了我们下一个主题是HILIC LC / MS进行氨基酸分析——这是相反的了!HILIC或亲水相互作用色谱法是最常用的多糖在生物制药分析,但它也是一个伟大的方式来分析小极性代谢物中发现细胞培养基。

在许多圈反向阶段常用的远远超过HILIC(这有点傻,HILIC是“正常的”相色谱!)。HILIC分离,固定相极性,初始流动相极性,分析物洗提大约至少大多数亲水-相反的反向相分离。你会明白我的意思看下面两个氨基酸分离。色谱是一个反相分离使用AdvanceBio氨基酸分析列。亮氨酸和异亮氨酸,脂肪族侧链,是最后一个洗提的氨基酸之一。色谱仪底部显示了最近推出了HILIC分离使用AdvanceBio女士花了媒体列。在这种情况下,你会看到亮氨酸和异亮氨酸洗提之前的大多数其他氨基酸。

洗脱顺序不是完全相反,因为在这个HILIC列分析物的电荷和流动相的pH值会影响保留,但是你可以看到总的想法,更多的疏水性分析物洗提比更多的亲水性分析物。

固定相,移动阶段也从我们习惯于flip-flipped逆转阶段。而不是从高含水流动相,HILIC分离开始于一个高度通常有机流动相乙腈。我个人保持公约使流动相水相,和移动阶段B有机流动相,这意味着我的梯度往往始于90 - 100%移动阶段B,而不是反过来。保持通道在LC水和通道B有机让它更容易在同一仪器不同色谱方法。

所以,小费的头号HILIC分离——双止,和三重检查你的移动阶段和梯度程序开始在高百分比的有机配置!我以前不小心混合起来,忘记改变梯度从从95%到95% b开始,我知道我不是一个人!当梯度逆转,没有保留,一切洗提孔隙体积。

在接下来的几周内我们会更深入详细的提示从HILIC分离得到最好的结果,和LC / MS分析氨基酸,但在你开始之前,去再一次检查你的手机阶段!

跟你说话很快

安妮

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