用HIC分析adc

由anne_blackwell一年多前|最后修改日期:雷竞技raybet一年多前

adc通常会提出超出单抗所带来的挑战的额外挑战-学习要注意什么以及如何调整您的方法。

大家好!本周，我的同事Andy将回来讨论adc的HIC方法开发。似乎单抗还不够强硬，adc呈现出另一种复杂程度，需要特别考虑以确保获得准确的结果。

用HIC分析adc

adc通常会在单抗之外提出额外的挑战-学习要注意什么以及如何调整您的方法

疏水药物分子结合到单克隆抗体(mAb)中形成抗体药物偶联物(ADC)，导致许多不同的分子种类具有不同程度的疏水。这意味着疏水相互作用色谱(HIC)是分析所有重要的药物与抗体比(DAR)的理想技术。

然而，疏水性的范围提出了一些重要的挑战:

样品溶液中硫酸铵过多可能导致DAR 6和DAR 8变体不能完全溶解，从而可能导致DAR值低估。同样，梯度条件需要确保所有DAR物种的洗脱。这种洗脱是通过包括丙二醇作为有机改进剂来实现的。

首先将样品溶解在稀释的水相流动相缓冲液中，然后加入高硫酸铵流动相，将样品稀释到所需水平。在一个透明的容器中进行，这样可以根据需要添加更多的高水相流动相缓冲液，从而防止任何浑浊的迹象(表明样品沉淀)。

根据快速入门指南(5991-9514EN)中的建议，使用1-0 M硫酸铵的梯度，同时使用5 - 25%的丙烷-2-醇梯度。这将确保所有物种的完全洗脱。由于洗脱液粘度高，较低的流速将是有益的。10厘米的柱子将提供最大分辨率;3厘米的柱子可以使分离更快。

通过选择合适的流动相和梯度条件，使用新型安捷伦AdvanceBio HIC柱可以在很短的分析时间内分离ADC DAR变体雷竞技raybetns (应用说明5994-0149EN有更多细节)。

再次感谢Andy和Sandeep!我将在两周后回来结束我们的HIC系列，并提供一些保持HIC平稳运行的提示和提醒。

关键词:生物柱，液相色谱，疏水相互作用色谱，HIC，方法开发，adc, AdvanceBio博客