选择合适的孔隙大小尺寸排阻色谱法

大家好,接下来的几周我有客人帖子从我的同事吴研发。本周他给一些好的洞察如何选择最好的交会孔隙大小的样本。在接下来的几个帖子他会拉开帷幕的研发认为当设计一个列的东西,以及他们如何影响你的分离。

选择合适的孔隙大小尺寸排阻色谱法

成功的大小排阻色谱法,有必要选择一列与合适的孔隙大小你正试图实现分离。分子太大,以适应任何毛孔会被排除在外,先洗提。较小的分子扩散到孔隙结构可以将需要更长的时间来洗提列,和洗提后:

一个好的经验法则是选择一个3 x大于孔隙大小分子你试图分析。单克隆抗体(mAb),分子的大小约为5 nm。如果你想单独马伯单体的聚合(二聚体、三聚体和高阶的物种),最大的分子可能接近10 nm大小。最合适的孔隙大小列这种分离因此30海里,或300。或者,如果你不确定大小的分子,你可以使用一列解决范围指南,例如下图:

在这种情况下,你可以看到大约150 kDa的马伯大小适合的解决范围300列。如果你正在研究一个更小的蛋白质,如胰岛素,你需要选择一个较小的孔隙大小列如100或130。重要的是要记住,这样的图表只是一个指南。尺寸排阻色谱法依赖于溶液中的差异大小,分子量,所以分子圆柱形或细长的会比预期早洗提,因为这将有一个大的比预期的大小而紧凑,球状分子。理想情况下,你应该选择一列提供了最大数量的孔隙体积,因此最大分离能力和分辨能力。你可以测量孔隙体积通过观察流动相的体积筛选了排除点和总渗透点之间。

定期运行的混合标准蛋白质,涵盖整个解决您所使用的列,就像在上面的色谱图中,确保您可以跟踪性能和额外的好处还在于帮助早期发现问题,让你减少仪器停机时间。

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