Priya.Jayaraman
雷竞技raybet在前两个博客文章中（选择合适的孔尺寸用于SEC和二氧化硅颗粒强度对低2 µm sec柱的重要性），我们讨论了二氧化硅的物理特性（例如孔径，孔体积和颗粒强度）如何影响SEC性能。在这篇文章中，我们想讨论键合化化学对SEC性能的生物递减性的影响。
在色谱图中通常看到的二氧化硅颗粒特性的影响与峰宽度和分辨率有关。相化学对色谱图的影响与峰形状，蛋白质吸附和小分子的保留时间转移有关。一个很好的指示表明表面是否是生物启动的，就是将尿苷的保留时间（一种小中性分子）与维生素B12（一种小的生物分子）的保留时间进行比较。如果B12保留时间比尿苷的保留时间更长，则通常表明某些表面硅烷酚相互作用。
对于SEC，粘合阶段的特征应显示：
- 非常亲水 - 无疏水的蛋白质和非特异性结合
- 全表面覆盖范围 - 没有表面硅烷醇活性，没有离子交换相互作用
- 稳定阶段 - 长期化学寿命，没有保留时间随时间变化
对于AdvanceBio SEC 200 µm，我们确实进行了粘结优化以实现上述目标：
- 这不是二醇相。许多SEC柱制造商使用DIOL相。我们发现，作为峰尾巴，二醇相并不理想。我们使用另一个亲水组为我们的2.7 µm AdvanceBio sec柱开发了一种新的亲水性键合化学，并发现它具有更好的峰形状。1.9 µm AdvanceBio SEC基于相似的相化学。
- 对于1.9 µm AdvanceBio sec，表面覆盖范围进一步优化。表面的总覆盖范围很好，但是覆盖过多将导致孔隙量更大。我们优化了粘结过程，以平衡粘结后的表面覆盖率和孔体积减小，以使我们仍然具有惰性表面，但粘结后保持较高的孔体积。
- 相互链接以确保化学稳定性。
下图显示了在400个注射寿命测试中色谱图的叠加层。没有蛋白质的吸附，也没有维生素B12在400次注射范围内移动。如果阶段不稳定并且在测试过程中发生变化，则B12通常会开始向右移动。
如果该相过于疏水并具有表面硅烷酚活性，则大蛋白将被吸附到表面，并且必须将柱子“启动”，其中必须进行一些首次注射以使表面活性饱和。可以使用列。下图显示了前五台对AdvanceBio Sec200Å1.9µm和其他竞争对手SEC 1.8 µm的新鲜列中的Biorad样品的注射。不需要“启动” AdvanceBio sec200Å1.9µm柱，而竞争对手的SEC 1.8 µm色谱柱对第一对注射的蛋白质吸附和需要启动。
总而言之，对于BIOSEC，粘合化学应提供：
- 亲水性和生物进入表面，可良好峰形，无特异性结合
- 列寿命的稳定阶段
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谢谢，吴！当我对专栏背后的“原因”有更好的了解时，我总是对评估和故障排除的色谱法更加自信。希望WU的这一系列帖子也可以帮助您做出更明智的SEC专栏和方法决策。
直到下一次 -
安妮
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