改头换面,衍生化色谱-第2部分信用证

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第2部分-液相色谱法

n .路透社* ACG全球技术支持CSD,船帆,荷兰

介绍

维基百科的定义“衍生”如下:

衍生化技术用于化学,,将化合物转换成产品相似的化学结构,称为导数。

一般来说,一个特定的官能团的化合物参与衍生化反应和转换推论偏离的衍生物反应,溶解度、沸点、熔点、聚合状态,或化学成分。产生新的化学性质可以用来量化或分离的推论。衍生化技术经常用于化学分析的混合物

这意味着化学衍生化是“湿”。尽管色析法可能不喜欢这种类型的化学,它是通常用于特定的用途,在第一段中提到的这个词的定义。类似,但不同。

在高效液相色谱中,衍生化GC可以更复杂的比他们的同行,因为的凝聚状态发生的一切。增加波动性是LC / MS应用程序只有一个可能的问题。而所有的衍生化GC pre-column,你也可以有邮报的专栏里在高效液相色谱中的应用过程。

经典Pre-Column衍生化

Pre-column衍生化进行离线之间的化学反应试剂和样品在高效液相色谱柱前注射。

图1:流程标准的高效液相色谱分析pre-column衍生化。

Chromotags

如果波动不是问题,那么检测能力。经典检测器的高效液相色谱紫外检测器,所以需要UV-active元件检测到。如果分子没有,您需要插入所谓的发色团的分子。试剂,被称为chromotags这样做。此表列出了常见的chromotag试剂:

试剂缩写

全名

Dbs-Cl (Dabsyl氯)

4-Dimethylamino-azobenzene-4磺酸酸氯

DNBA

3,5-Dinitrobenzyloxyamine盐酸盐

DNBC

3,5-Dinitrobenzoylchloride

DNBDI

(O) - 3 5-Dinitrophenylmethyl - n, N-diisopropylthiourea

DNPBA

3,5-Dinitrophenylmethyl n-propylamine盐酸

FDNB

Fluoro-2, 4-dinitrobenzene

网卡

1-Naphthylisocyanate

Ninhydrine

4、5-Benzo-2 2-dihydroxy-cyclopentan-1 3-dione

PBPB

p-Bromophenyl溴乙基keton

由供应者

Phenylisothiocyanate

PNBA

(O) - p-Nitrophenylmethyl盐酸羟胺

PNBA

(O) - p-Nitrophenylmethyl盐酸羟胺

PNBDI

(O) - p-Nitrophenylmethyl - n, N-diisopropylthiourea

PNBPA

p-Nitrophenylmethyl阿明丙酯盐酸盐

SDPNA

N-Succinimidyl-3, 5-dinitrophenylacetate

SNPA

N-Succinimidyl-p-nitrophenylacetate

表1:常见chromotag试剂。

试剂缩写	全名
Dbs-Cl (Dabsyl氯)	4-Dimethylamino-azobenzene-4磺酸酸氯
DNBA	3,5-Dinitrobenzyloxyamine盐酸盐
DNBC	3,5-Dinitrobenzoylchloride
DNBDI	(O) - 3 5-Dinitrophenylmethyl - n, N-diisopropylthiourea
DNPBA	3,5-Dinitrophenylmethyl n-propylamine盐酸
FDNB	Fluoro-2, 4-dinitrobenzene
网卡	1-Naphthylisocyanate
Ninhydrine	4、5-Benzo-2 2-dihydroxy-cyclopentan-1 3-dione
PBPB	p-Bromophenyl溴乙基keton
由供应者	Phenylisothiocyanate
PNBA	(O) - p-Nitrophenylmethyl盐酸羟胺
PNBA	(O) - p-Nitrophenylmethyl盐酸羟胺
PNBDI	(O) - p-Nitrophenylmethyl - n, N-diisopropylthiourea
PNBPA	p-Nitrophenylmethyl阿明丙酯盐酸盐
SDPNA	N-Succinimidyl-3, 5-dinitrophenylacetate
SNPA	N-Succinimidyl-p-nitrophenylacetate

所有这些试剂携带至少一个芳环或更大的π电子系统,这是responsi-ble紫外检测。Dabsylchloride可以,例如,用于derivatize胺,硫醇,咪唑类、酚类和醇类。

图2:Dabsylation醇。

一个典型的过程如下:

一般程序:衍生品在30分钟内就形成了在室温下或在丙酮在10分钟内70°C,缓冲或乙腈。

混合醇的例子:1毫升酒精与10毫升100毫米碳酸氢钠和20毫升10毫米dabsyl氯,回流10分钟,酷,与二乙醚提取,用pH值3柠檬酸缓冲液,蒸发有机层,重建并注入一个整除。

Fluorotags

除了标准的紫外检测,也经常用于高效液相色谱荧光检测。化学试剂称为fluorotags用于引入团体具有荧光特性的分子。表2显示了一个常见的fluorotag试剂的列表:

试剂缩写

全名

AECF

2 -乙基氯甲酸酯(9-Anthranyl)

BDMQ

-quinoxalinone 3-Bromomethyl-6 7-dimethoxy-1-methyl-2 (1 h)

BMC (BrMmC)

4-Bromomethyl-7-methoxycoumarine

BrMaC

4-Bromomethyl-7-acetoxycoumarine

在酰肼

1-Dimethylaminonaphthalene-5-sulfonic酸酰肼,丹磺酰酰肼

Dithiobis (amino-dimethoxybenzene

2,2’-Dithiobis (1-amino-4 5-dimethoxybenzene)

Dns-Cl (DANS-Cl)

1-Dimethylaminonaphthalene-5-sulfonic酸性氯化物,丹磺酰氯

EDTN

(1-Ethoxy-4) - dichloro-s-triazinyl萘

Fluorescamine (FLURAM)

4-Phenylspiro (furan-2 (3 h), 1土卫四-phthalan) 3, 3

FMOC

(9-fluorenyl)甲基氯甲酸酯

HCPI

(2)- 4-Hydrazinocarbonylphenyl 4, 5-diphenylimidazole

NBD-Cl

7-chloro-4-nitrobenzyl-2-oxa-1, 3-diazole

NBD-F

7-Fluoro-4-nitrobenzyl-2-oxa-1, 3-diazole

NDA

萘dicarboxaldehyde

OPA

o-Phthaldialdehyde

表2:共同fluorotag试剂的列表。

(9-Fluorenyl)烷基氯甲酸酯、甲基衍生物,FMOC,或乙导数,卡宾达飞地解放阵线,经常用于胺和氨基酸。乙导数进行不对称取代/光学纯手性碳原子,也可以在这两种对映体,所以它可以检查两种对映体的,例如,一种氨基酸的形成非对映的衍生物在高效液相色谱柱与一个非手性的阶段:

图3:衍生化的(S)与(S) 1 -丙氨酸(9-fluorenyl)乙基氯甲酸酯(卡宾达飞地解放阵线)。

一个典型的氯甲酸酯试剂的过程如下:

在缺乏水:加5µL的氯甲酸酯2 - 10的样品在丙酮mix-tureµL乙腈/吡啶/酒精(22:2:1、酒精:甲醇、乙醇或氯乙醇)和动摇,几秒钟。注入。

在水的存在:50µL pyridine-water解决方案(5:1),50µL乙腈/乙醇(2:3)和5µL氯甲酸酯。萃取是100年由µL 200µL水和正己烷。In-ject己烷层的整除。

Fluorotags往往也chromotags由于扩展芳香系统试剂的结构,但也chromotags通常不是Fluorotags。

挥发性试剂LC / MS

这是关于与全氟有机酸酐酰化反应,如三氟乙酸anhy-dride或同源pentafluoropropanoic heptafluorobutanoic酸酐。介绍了酰化反应本文的第一部分对气相色谱法。

邮报的专栏里衍生/在线衍生化

邮报的专栏里衍生化在线化学反应,进行分离后发生之前,组件进入检测器:

图4:流程标准的高效液相色谱分析邮报的专栏里衍生化。

图4中使用的方法的一个示例是邮报的专栏里fluorotag衍生的磺酰胺类[1]:

图5:邮报的专栏里衍生的磺胺(蓝色)与benzene-1 2-dicarbaldehyde (OPA)和2-sulfanylethanol。激励可以测量在302纳米和412纳米波长的发射。

邮报的专栏里的另一个可能的反应是固定化酶反应器(IMERs),在使用一种酶催化某些反应之前,组件的探测器。一个例子是乙酰胆碱的反应从carboxy-N胆碱,胆碱和氧化氮、N-trimethylmethanaminium,酸和过氧化氢,可以很容易地由电化学检测器检测到低皮摩尔/ femtomole水平[2]。(1)第一反应是由乙酰胆碱酯酶催化和第二(2)胆碱氧化酶,两种酶固定化的im反应堆。

图6:enzyme-catalzed衍生化乙酰胆碱和胆碱和相应的酸。

缺点

如果你注入样品连同一个未反应的衍生化试剂或他们的反应产品,它可以发生,基线噪音的增加,但是通常检测特定的灵敏度仍增加。

邮报的专栏里系统你需要另一个泵的试剂和混合反应室。

相比标准试剂的数量在气相色谱法,高效液相色谱试剂的量是非常高,你有很多特定组件的具体反应。事实上,每一个反应在有机化学衍生化反应为高效液相色谱组件。

结论

衍生化液相色谱用于:

插入紫外线活跃的团体
插入荧光集团
插入或产生电化学测量组
提高LC / MS应用程序的波动

引用

p .七弦琴,c . l . Erroz n . Campillo m . Hernandez-Cordoba;“由液相色谱测定食品中磺胺类药与邮报的专栏里荧光衍生化”,j . Chromatogr。一个,726,1996,125 - 131。
g . Damsma d·拉默特·范·Bueren b h . c . Westerink a s角;“乙酰胆碱和胆碱的测定femtomole范围通过高效液相色谱法,邮报的专栏里酶反应器,和电化学检测”,色层法24(1),1987年,827 - 831。